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倒置熒光顯微鏡明場和暗場的成像方法講解

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  今天小編給大家講講倒置熒光顯微鏡明場和暗場的成像方法:
 
  倒置熒光顯微鏡根據襯度形成的機制,對散射吸收像可以有兩種成像方式:
 
  (一)明場成像法(BFI),即只讓近軸區的透射電子柬通過物鏡光闌,形成亮背景上的暗圖形像。物鏡光闌的孔越小,明場像的襯度越大;
 
  (二)暗場成像法(DFI),即只讓部分大角度的散射束或晶體的某衍射束通過物鏡光闌,而將透射束擋掉。這樣形成的是暗背景上的亮圖形像。這種暗場成像法可以提高圖像的襯度,是一種重要的成像方法。
 
  倒置熒光顯微鏡實現暗場戊像的方法大致可分四種:
 
  (一)維持沿光軸垂直照明而移動物鏡光闌;
 
  (二)利用傾斜照明而取在光軸方向的散射束,這稱為中心暗場成像法(CDFI);
 
  (三)采用中心擋束而有環形透光區的物鏡光闌;
 
  (四)用環形透光的聚光鏡光聞和中心圓孔形的物鏡光闌。
 
  這里第一種方法z簡便,但利用的是遠袖區中的電子成像,故像差大,圖像質量不會很好。第二法可避免上述缺點,但熒光顯微鏡的物鏡光闌接收到的只是一小部分散衍射電子,因此效率較低。又光闌的一側經常受到大量電子轟擊,容易造成非對稱污染,從而影響圖像質量。環形物鏡光閑在這方面有所改進,但缺點是制作困難,且難以做到*軸對稱。鑒于對照明系統的要求相對放寬松,所以可采用z后一個方案,在聚光鏡處加一個環形光闌,對樣品作空心柬照明。這種裝置的效果。它的圖像分辨率可與明場像的接近,而襯度又大大提高。
 

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